耶拿高速PCR儀在單細胞轉錄組測序技術中的應用

耶拿高速PCR儀(yi) 在單細胞轉錄組測序技術中的應用

01

什麽(me) 是單細胞轉錄組測序

      單細胞轉錄組測序就是在單個(ge) 細胞水平上對轉錄組進行測序的技術，可以研究在單個(ge) 細胞內(nei) 基因表達的情況。而傳(chuan) 統的測序技術，是在多細胞基礎上進行的，得到的是多細胞中信號的均值，往往就會(hui) 忽略了細胞的異質性，會(hui) 掩蓋細胞間差異性的信號（圖1）。而單細胞轉錄組測序技術則可以在單細胞水平上分析細胞內(nei) 群體(ti) 異質性，定義(yi) 細胞類型，判斷細胞狀態以及細胞的動態轉變，在當下腫瘤方向研究、發育生物學、生物標誌物等研究領域都具有廣闊的應用潛力。

圖1.單細胞轉錄組測序和傳(chuan) 統測序的區別（摘自網絡）

02

單細胞轉錄組測序技術流程

      以10x Genomics單細胞轉錄組測序技術為(wei) 例，該技術流程可以簡單總結為(wei) 四個(ge) 步驟，分別是：製備樣本，單細胞微滴（GEMs）生成，構建文庫和測序以及分析（圖2）

圖2. 單細胞轉錄組測序技術流程

      其中，在逆轉錄、cDNA擴增以及構建文庫步驟中，PCR儀(yi) 扮演著重要的角色，具體(ti) 細分步驟可參考下圖（圖3），包括逆轉錄，cDNA擴增，片段化、末端修複和加A尾，接頭連接以及文庫擴增步驟：

圖3. 單細胞轉錄組測序中需要應用PCR儀(yi) 的步驟

       由於(yu) 單細胞轉錄組測序在使用PCR儀(yi) 的過程中涉及到大體(ti) 積的體(ti) 係構建（100ul），對PCR儀(yi) 加熱模塊的溫度均一性和精確度都有較高的性能要求，德國耶拿Biometra TAdvanced 96SG具有優(you) 異的溫控係統，溫度準確性達到±0.1℃，溫度均一性達到±0.15℃，適用於(yu) 5-100ul反應體(ti) 係大小，是單細胞轉錄組測序流程中逆轉錄、cDNA擴增和文庫構建步驟中的得力助手，可以提供穩定、可靠，更多符合下遊測序要求的產(chan) 物。

    值得一提的是，德國耶拿Biometra TAdvanced 96SG是10xGenomics單細胞轉錄組測序操作手冊(ce) 中推薦使用的PCR儀(yi) 之一（圖4），這也進一步說明10xGenomics對Biometra TAdvanced 96SG性能的肯定。

圖4. 10xGenomics在單細胞轉錄組測序手冊(ce) 中推薦了Analytikjena Jena的Biometra TAdvanced 96SG（摘自10xGenomics單細胞轉錄組測序操作手冊(ce) ）