安捷倫 Cary 60 紫外-可見分光光度計測定 4°C下微量 DNA 的純度

更新時間：2025-01-24 點擊次數：397

安捷倫(lun) Cary 60 紫外-可見分光光度計配置微光纖

探頭測定 4 °C 下微量 DNA 的純度

應用摘要

醫藥/生物技術

總結

安捷倫(lun) Cary 60 紫外-可見分光光度計是在儲(chu) 存環境（如冰箱）下直接測定微量生

物樣品的理想儀(yi) 器。本應用報告展示了如何使用 Cary 60 及其微光纖探頭附件測定 4 °C 下

的 DNA 純度——結果表明，使用該儀(yi) 器能夠大幅節省時間和成本，同時數據精確度和重現性毫無損

失。

• 不再需要比色皿

• 直接測定 4 °C 冰箱中的樣品

• 節省每次分析的時間與(yu) 成本前言

多年以來，紫外-可見分光光度計一直是生物技術領域中測定 DNA 純度和濃度的一項重要工具。該

方法最早由 Warburg 和 Christian 在 1942 年開發 1，隨後由 Sambrook 等人在 1989 年進行了

優(you) 化，使其可用於(yu) 實驗室中簡便、快速的測定 2。分光光度法的主要優(you) 點在於(yu) 測定過程： 1) 簡便；

2) 準確； 3) 不破壞樣品。這一方法可以節省時間而不損失數據質量，並且在測定過程中無需使用大

體(ti) 積的樣品或額外的耗材，從(cong) 而帶來經濟效益。

在之前的文章中，我們(men) 介紹了安捷倫(lun) Cary 50 紫外-可見分光光度計配置 Hellma（德國 Hellma GmbH & Co.）的 Traycell 微量比色

池紫外-可見在室溫下準確、可重現地測定微量 DNA 的方法 3。在本研究中，我們(men) 采用帶光纖探頭的 Cary 60 紫外-可見分光光度計進

行了方法擴展研究，在 4 。C 以及普通實驗室環境光照條件下測定了小體(ti) 積樣品。本方法使得用戶可以將儀(yi) 器靠近樣品，而不是像傳(chuan)

統光譜方法那樣將樣品放入儀(yi) 器中，從(cong) 而能夠在很短的時間內(nei) 完成分析。Cary 60 的光學設計使這一優(you) 勢得以實現，它主要憑借

其的高強度閃爍氙燈以及最新型的電子器件，使係統能夠有效地監控吸光度的微小變化而不受環境背景光的任何影響。本文深入

討論了這一方法的主要優(you) 點。

儀(yi) 器與(yu) 材料

部件號

說明

G6860AA

7910035600 G6866A

6610000800

D-4764（Sigma 化學公司）

Cary 60 紫外-可見分光光度計，配備

WinUV 軟件和 HP 電腦（台式機）微光纖探頭

光纖探頭耦合器

石英比色皿（光程 1 cm；兩(liang) 隻裝）小牛胸腺 DNA；1

方法與(yu) 結果

將小牛胸腺 DNA 用純淨水（MilliQ）稀釋得到不同濃度的樣品，濃度範圍 0–50 µg/ml。

配有光纖耦合器以及微探頭的 Cary 60, 如圖 1 所示。在 Eppendorf 管中加入 150 µL 純淨水（MilliQ），將其讀數作為(wei) 空白。

由於(yu) 分子生物學試劑通常保存於(yu) 冷藏條件下，因此所有樣品直接從(cong) 4 。C 冰箱中取出並進行分析。

圖 1. 配有光纖附件的 Cary 60 測試 4 。C 下 Eppendorf 管中 150 μL DNA 的示意圖。

開始時，使用 WinUV 軟件“掃描"模塊在 340 到 240 nm 範圍進行掃描以確認最大吸收峰以及所購買(mai) 的按 50:50 稀釋的 DNA 樣品的可靠性（圖 2）。

波長(nm)

圖 2. 對 4 。C 下兩(liang) 個(ge) 濃度的 150 µL DNA 樣品的掃描表明特征吸收峰出現在 260 nm 處。注意：50 µg/ml DNA 最大吸光度值 1.0Abs，25 µg/ml DNA 最大吸光度值 0.5Abs，遵守 Beer Lambert 定律（A = εcl）。

為(wei) 了確認 DNA 的純度，使用 WinUV 軟件專(zhuan) 門的 “RNA/DNA"模塊測定 260/280 比率，該模塊可自動計算 DNA 樣品的純

度。如圖3 所示，這一模塊使用非常簡單，可以在一分鍾內(nei) 完成分析。

圖 3. 簡便、專(zhuan) 用的 Cary WinUV 自動計算 DNA 的純度、可靠性和濃度

最後，繪製濃度曲線以評估同一實驗室條件下不同濃度 DNA 樣品讀數的線性和重現性（圖4）。在兩(liang) 個(ge) DNA 樣品讀數間隙使

用 MilliQ 純淨水清洗微探頭。

討論

測定五個(ge) 樣品所用的時間不到兩(liang) 分鍾。傳(chuan) 統方法使用微量比色皿，需要等待樣品加熱至室溫，而且在每兩(liang) 次測定間需要清洗微量比色

皿。總之，使用 Cary 60 光纖係統可以顯著降低大約 80% 的分析時間，同時采用光纖技術不易受到樣品處理引起的潛在汙染。使用微

探頭可以獲得高精度的數據並大大縮短測定低溫樣品所需的時間，這表明 Cary 60 是一種適於(yu) 測定生物樣品（如 DNA）的簡便、快速且

高性價(jia) 比的係統。本方法可以輕鬆地直接擴展到其它樣品類型，例如可在 280 nm 處測定蛋白質。

結論

Cary 60 紫外-可見分光光度計是使用光纖采樣的理想儀(yi) 器，它的高強度閃爍氙燈可以提供的靈敏度和重現性。本應用報告所展示的測

定 DNA 樣品時的分析速度、結果重現性以及易用性證明了該儀(yi) 器係統的強大優(you) 勢。

使用帶光纖的 Cary 60 分析生物樣品還具有如下優(you) 點：

• 可以直接測定高溫或低溫樣品（4 °C – 110 °C）而無需考慮冷凝的問題，如果使用比色皿則由於(yu) 冷凝可能導致結果不正確或重現性不好

• 樣品體(ti) 積不受限製，可以低至 40 µL，也可以無限大

• 無需購買(mai) 昂貴的石英微量比色皿，更節省了清洗比色皿的時間

• 使用反射探頭還可以分析固體(ti) 、粉末或凝膠類樣品

圖 4. 使用微探頭光纖附件在實驗室常規光照條件下測定 4 °C 下 Eppendorf 管中 50 µL DNA 樣品（0–

50 µg/mL）得到的濃度曲線。校準方程：Abs = 0.02393*濃度；相關(guan) 係數 = 0.99126。